服務(wù)介紹：

　　蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot ) ，簡稱WB ，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結(jié)合，用特異性的一抗結(jié)合目標(biāo)蛋白，用HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細(xì)胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù)，常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。

里來生物技術(shù)優(yōu)勢：
（1）高效蛋白提取液進(jìn)行高質(zhì)量蛋白的提取，同時(shí)高效的蛋白酶抑制劑有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用；
（2）里來生物擁有多年的Western Blot檢測經(jīng)驗(yàn)，為客戶提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù)；
（3）里來生物為客戶設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)客戶樣品具體情況摸索上樣量和抗體稀釋度。

實(shí)驗(yàn)樣品要求：
（1）細(xì)胞不少于5×10⁶個(gè)；
（2）組織樣品不少于50mg；
（3）總蛋白濃度不低于 2μg/μl（至少50μl）；

注意事項(xiàng)：
（1）每張膜上做一種目的蛋白和相應(yīng)的內(nèi)參蛋白。每張膜上可以做8個(gè)樣品。一般狀況下，2周即可完成實(shí)驗(yàn)。如遇特殊情況，如一抗不好，蛋白濃度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期會(huì)有所延長。

（2）Western Blot細(xì)胞蛋白樣本的準(zhǔn)備及運(yùn)輸：去掉培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下，用1ml槍吸取細(xì)胞易于1.5ml EP管中，快速離心（升至轉(zhuǎn)速就可stop）去除上清后，可按下面兩種方法運(yùn)輸：A.細(xì)胞干運(yùn)輸：將細(xì)胞干放入液氮速凍，-80℃保存; 如需長途過夜運(yùn)輸，建議干冰運(yùn)輸；如當(dāng)天送達(dá)樣本，可用液氮或者-80℃冰袋運(yùn)輸；B.細(xì)胞裂解液運(yùn)輸：加入一定量的胞裂解液后即可冷藏運(yùn)輸（冰袋或者冰盒）。如需檢測磷酸化蛋白，建議裂解液中加入終濃度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保護(hù)蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，則置于冰上裂解1 h，12000rpm離心10 min后取上清，即為蛋白樣本。蛋白樣本可-20度冷藏運(yùn)輸（建議快遞寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。

（3）蛋白樣本運(yùn)輸：蛋白樣本需要經(jīng)過濃度測定，再進(jìn)行變性，變性時(shí)先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止變性導(dǎo)致的蛋白沉淀析出。變性的蛋白可直接冷藏運(yùn)輸，-20℃穩(wěn)定保存。